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凝胶过滤层析基本概念

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大家好,我是ӒKTA的小Ӓ,这周又和大家见面啦。今天我们来一起快速扫盲一下层析柱中最基本的一种类型——凝胶过滤层析的基本介绍和选择吧~

凝胶过滤层析(很多人喜欢叫做分子筛)是根据样品的分子大小对样品进行分离的一种简单温和的层析技术。凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析,是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。不同于离子交换层析和亲和层析,凝胶过滤的层析样品不与层析柱料结合,因此,缓冲液成分不直接影响分辨率。

 

凝胶过滤的特点是:

★ 根据分子大小和形状进行分离

★ 是一种非吸附的分离方式

★ 缓冲液成分不直接影响分辨率,只需要一种缓冲液

★ 操作便捷


分离原理

层析柱中的填料是球状颗粒的惰性的多孔网状结构的柱料,多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质。在加入样品之后,样品中的小分子物质能进入球状填料内部,在柱子中停留时间较长;而大分子物质不能进入球状填料内部,停留时间较短。所以当样品经过凝胶过滤层析柱分离后,样品中的不同分子大小的物质就可以被分离开了。


在上样后,大分子的样品先被洗脱下来,小分子的样品后被洗脱下来。


分离步骤

凝胶过滤层析可以分为 平衡—上样—洗脱—再生 四个过程。分离的原则是:要分离的样品分子大小差别一倍以上


凝胶过滤的选择

1、选择合适的填料

✔ Superdex Increase:高分辨率首选,平均颗粒9μm,平均粒径更小且粒径分布更集中,刚性和硬度更强,具有更高的选择性

✔ Superose Increase:具有更宽的分离范围和温和的分离条件

✔ Sephacryl:经济高效,具有更多的选择

✔ Sepharose:传统的偶联琼脂糖填料,非特异性吸附低,回收率高,适合于分子量大小差异大,对分辨率要求不高的样本

✔ Sepharose CL:Sepharose和2,3二溴丙醇反应而成,特别适合含有机溶剂的分离,能承受较强的在位清洗

✔ Sephadex:快速脱盐,置换缓冲液

✔ Sephadex LH-20:羟丙基化的新型葡聚糖填料,选择性更好,具有凝胶过滤层析和吸附型层析的特点,特别适合于分离各种天然产物和中草药等


2、选择合适的分离范围


3、选择合适的层析柱

精细纯化:


制备型:HiLoad,HiPrep


小提示:有些柱子的名称中会标注柱子的填料类型,规格和材质。

例如Superdex 200 Increase 10/300 GL,Superdex Increase表明柱子的填料类型;

10/300表明柱子的内径是10mm,柱床高300mm;

GL表明柱子是玻璃材质,Tricorn柱形式


今天的介绍就到这里啦,下周我们会继续介绍凝胶过滤层析相关知识和产品,请大家继续关注哦~

 

 

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