蛋白技术资料

纯化中的缩略语和基本术语介绍

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大家好，我是ÄKTA的小Ä。上周我们一起学习了蛋白纯化的基本介绍和常用方法，在后面的内容中，我们会对每一种纯化柱类型都进行详细的介绍的。大家在看纯化产品说明书或者指导手册的时候是不是也经常会因为遇到很多缩略语和基本术语而犯难呢？不用担心，小Ä已经帮大家都整理好了哦，大家一起来看看吧~

通用缩略语：

纯化中的缩略语

A280nm：指样品在A280nm波长的紫外吸收。蛋白质分子中常含有酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等苯环结构，在紫外280nm波长处有最大吸收峰。

SEC：凝胶过滤层析（Size Exclusion Chromatography），有时也称为GF（Gel Filtration），是纯化的一种类型

AC：亲和层析（Affinity Chromatography），是纯化的一种类型。

IEX：离子交换层析（Ion Exchange Chromatography），文献中也被记为 IEC，是纯化的一种类型

HIC：疏水相互作用层析（Hydrophobic Interaction Chromatography），是纯化的一种类型

RPC：反相层析（Reversed Phase Chromatography），是纯化的一种类型

CIPP：三步纯化策略，捕获（Capture）、中度纯化（Intermediate purification）、精细纯化（Polishing）的简称

CIP：在位清洗，指预装柱连在仪器上进行清洗

CV：柱体积

Kav 和logMr：分配系数和对数分子量，定义凝胶过滤柱料选择的术语

Mr：相对分子量

pI：等电点，指蛋白具有零表面电荷时的pH值

Rs：分辨率，指峰之间的分离度

产品名称中的缩略语

HP：High Performance，高性能，填料平均颗粒大小约34μm，适合高分辨率的分离纯化

FF：Fast Flow，快流速，填料平均颗粒大小约90μm，较HP颗粒粗，具有良好的分辨率及轻松实现规模扩大的分离纯化

HMW：高分子量

LMW：低分子量

HR：高分辨率

i.d.：内径

ST：不锈钢材质的柱子

PE：聚醚醚铜材质的柱子

GL：玻璃材质的柱子

PE：Peek材质的柱子

PC：精密柱，适用于微纳克和微克级别的样品的微纯化

pg：制备级，纯化规模比半制备级别较大

重要的术语和参数：

1、分离体积： 分为无效体积，洗脱体积和总体积

Vo：无效体积。又叫做外水体积。指无法进入凝胶过滤填料的分子洗脱体积，由于比填料中最大的孔径都要大，所以直接从填料外流出。

Ve：样品的洗脱体积。样品从进样到出样的体积。

Vt：纯化柱中总液体体积。

2、分辨率：表明纯化柱分离不同样品的出峰的能力。分辨率取决于选择性和有效性。

检测方法：分离系数Rs

分离系数小于1时，不能得到较好的分离效果；分离系数应至少等于1；分离系数过大时，会造成层析柱的浪费

两峰之间的距离较大，表明选择性较好；

峰较高较窄，表明有效性较好。

3、柱效：表明层析柱的性能。层析柱的柱效应该固定间隔时间进行检测，通过检测理论塔板数和峰形对称性可以表明柱效。

柱效测定方法

测柱效方法	方法1	方法2
流动相	去离子水	0.4 M NaCl
样品	1%丙酮（v/v）	2M NaCl
上样量	1%柱体积
流速	30 cm/h
积分曲线	UV 280	Cond
判断标准1	HETP > (1,000,000/粒径/3)
判断标准2	0.8 < As < 1.5

判断标准1：

HETP > (1,000,000/粒径/3)

HETP=L/N

HETP：理论踏板数

L：柱床高度

N=5.54 x (Ve/W1/2)2

Ve：峰洗脱体积

W1/2：50%峰高位置的峰宽

判断标准2：

0.8 < As < 1.5

As：峰对称性

As=b/a

b：10%峰高位置的后一半峰宽

a：10%峰高位置的前一半峰宽

As = 1，峰型较好

As > 1，峰拖尾

As < 1，峰前倾

4、线性流速：流体前沿沿柱管体积单位时间向下的迁移距离（cm/hr）

当比较不同大小纯化柱的性质时，流速表示为线性流速（cm/h）比较方便。然而，流速经常测量为体积流速（ml/min）。线性流速和体积流速的转换为：线性流速（cm/h）=体积流速（ml/min）x 60 / 层析柱横截面积（cm²）

5、载量：指单位体积填料可以处理的样品量

载量取决于：

▶ 蛋白性质

-分子量，形状，带电性，疏水性等

▶ 填料性质

-性质，粒径大小，配基等

▶ 操作条件

-PH，盐浓度，添加剂，蛋白浓度，温度，流速

今天的介绍就到这里了啦，下周我们会介绍凝胶过滤层析的基本概念和原理，请大家继续关注哦~

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